El Lamborghini 400GT era un auto deportivo 2+2 sucesor del 350GT, fue presentado en el salón de Génova de 1966. El motor proveniente del 350 fue llevado a los 3.929cc. logrando incrementar la potencia hasta los 320HP. El 400 GT tenía una carrocería diferente a su antecesor, la linea de techo era diferente y era mas largo permitiendo acomodar a dos personas en la parte trasera en lugar de una como era el caso del 350, y era obra de Carrozzeria Touring. El 400GT mejoró con la adición de una nueva caja de cambios de diseño Lamborghini, al estilo de las Porsche de la época que mejoró significativamente el manejo. Un total de 347 unidades fueron construidas desde 1966 hasta 1968 cuando fue reemplazado por el Islero. Es de hacer notar que hubo una variante del Lamborghini 350GT con el motor V12 de 4 litros del 400, que fue denominado 400GT, solo se fabricaron 23 de estas coupes, dos de ellas con una fantástica carrocería de aluminio.